KROMATOGRAFI PENUKAR ION

KROMATOGRAFI PENUKAR ION

1.      PRINSIP

Pemisahan berdasarkan perbedaan kekuatan elektrostatik antara ion sampel dan ion muatan tetap didalam matriks tidak larut dalam fase diam

2.      KEGUNAAN

Untuk analisis asam amino, asam nukleat, asam organik

3.      FASE YANG DIGUNAKAN

a.       Fase diam : resin organik atau non organik, zeolitas

b.      Fase gerak : air/ dapar, cuplikan ion yang mengandung ion-ion yang bersaing untuk mendapatkan tempat pada fase diam

4.      JENIS RESIN

a.       Resin penukar kation

Mengandung gugus aktif yang bermuatan negatif.

Untuk pemisahan zat yang bersifat basa.

-          Asam sulfonat : penukar kation kuat à ph >1

-          SCX : penukar kation lemah à ph >6

b.      Resin penukar anion

Mengandung gugus aktif yang bermuatan positif.

Untuk pemisahan zat yang bersifat asam.

-          gugus amin kuarterner sebagai basa kuat : penukar anion kuat à ph<11

-          amin primer sebagai basa lemah : penukar anion lemah à ph <9

5.      REAKSI PENUKAR KATION DAN ANION

penukar kation : X⁺ + R^-Y⁺ à X⁺ R^- + Y⁺

penukar anion  : X^- + R⁺Y^- à X^- R⁺ +Y^-

6.      FUNGSI DAPAR DALAM AIR

a.       menyediakan ion lawan untuk kesetimbangan kation

b.      menjaga kekuatan ion

c.       PH fase gerak

Sumber:

“Analisis Fisikokimia : Kromatografi Volume 2”

Oleh : Prof. Dr. Harmita, Apt.

Penerbit: buku kedokteran EGC

KROMATOGRAFI PASANGAN ION

KROMATOGRAFI PASANGAN ION

1.      PRINSIP

Terjadinya penyerapan pereaksi pasangan ion kedalam fase diam dan pemisahan sampel ion asam sebagai fungsi PH. Pada kromatografi pasangan ion ini ditambahkan pereaksi pasangan ion pada fase gerak

2.      KEGUNAAN

Pemisahan senyawa ionik dan non ionik

3.      FASE YANG DIGUNAKAN

a.       Fase gerak : asetonitril, etanol

b.      Fase diam : C8, C18

4.      JENIS PEREAKSI PASANGAN ION YANG DITAMBAHKAN PADA FASE GERAK

a.       Alkil sulfonat : untuk pemisahan senyawa basa

b.      Garam tetraalkil amonium : untuk pemisahan senyawa asam

5.      PENGATURAN JARAK RETENSI DAN SELEKTIVITAS PADA KROMATOGRAFI PASANGAN ION PERLU DIATUR:

a.       Kekuatan pelarut

b.      Suhu

c.       Konsentrasi dapar

d.      Jenis pelarut

e.       Jenis dapar dan garam tambahan

f.        Pengubah amin

6.      MASALAH YANG TERJADI PADA KROMATOGRAFI PASANGAN ION

a.       Puncak artefak timbul

Solusi: cocokkan komposisi pelarut sampel dan fase gerak

b.      Keseimbangan kolom lambat

Solusi: penghilangan pereaksi pasangan ion dari pelarut pencuci, penyeimbangan kolom dengan fase gerak baru

c.       Bentuk puncak buruk

Solusi: tingkatkan suhu kolom

7.      KELEBIHAN

a.       Waktu kerja singkat

b.      Hasil reproducibel

c.       Peak tajam

d.      Dapat langsung memperoleh hasil pemisahan analit terionisasi dan tidak

e.       Pemisahan ionik dan nonionik dalam sampel yang sama

8.      KEKURANGAN

a.       Larutan ionik seringkali bersifat korosif sehingga koloni tidak tahan lama

b.      Beberapa larutan ionik mengasorbsi pada panjang larutan UV , tetapi membatasi detektor UV

c.       Bahan berdasar silika terbatas pada PH<7,5

d.      Fase gerak tidak boleh dibiarkan semalaman, tapi diganti dengan air

Sumber:

“Analisis Fisikokimia : Kromatografi Volume 2”

Oleh : Prof. Dr. Harmita, Apt.

Penerbit: buku kedokteran EGC

KROMATOGRAFI PARTISI

KROMATOGRAFI PARTISI

1.      PRINSIP

Terjadinya partisi antara fase gerak dengan fase diam

2.      KEGUNAAN

Untuk senyawa non polar hingga sangat polar dan memiliki gugus fungsional yang terionisasi lemah.misal antrasel dan paration

3.      Penyangga yang digunakan berupa partikel padat tempat fase diam terikat

4.      BERDASARKAN FASE TERIKAT KROMATOGRAFI PARTISI DIBAGI:

-          Fase normal : untuk memisahkan senyawa non polar yang larut dalam hidrokarbon dan bobot molekul <1000

-          Fase terbalik  : memisahkan senyawa polar, seperti alkohol dan amina

5.      PERBEDAAN ANTARA FASE NORMAL DAN FASE TERBALIK PADA KROMATOGRAFI PARTISI

No	Jenis/sifat	Fase normal	Fase terbalik
1	Fase diam (kolom)	polar	Non polar
2	Jenis kolom	Silika , alumina	-C8, -C18, -CN, -fenil
3	Fase gerak (eluen)	Non polar	Polar
4	jenis	Heksan, klorofrm, eter, campuran pelarut	MeOH, H2O, CH3CN, Etanol:air, asetonitril : air, hidrofuran : air, dioksan :air
5	Fase terikat yang diikatkan pada penyangga	Alkil nitril, alkilamin	Gugus oktil, gugus oktadesil
6	Urutan elusi	Non polar diawalàpolar diakhir	polar diawalànom polar diakhir

Sumber:

“Analisis Fisikokimia : Kromatografi Volume 2”

Oleh : Prof. Dr. Harmita, Apt.

Penerbit: buku kedokteran EGC

KROMATOGRAFI EKLUSI

KROMATOGRAFI EKLUSI

1.      PRINSIP

Pemisahan berdasarkan bobot molekul atau garis tengah efektif analit. Molekul-molekul kecil akan melewati pori-pori gel  sedangkan molekul besar akan melewati sela-sela gel lebih cepat daripada molekul yang melewati pori-pori kecil

2.      KEGUNAAN

a.       Memisahkan campuran bobot molekul tinggi dan rendah

b.      Fraksinasi polimer

3.      KEUNTUNGAN

a.       Pita-pita sempit

b.      Waktu pemisahan pendek

c.       Waktu pemisahan mudah diramalkan

d.      Harga tr sesuai ukuran molekul

e.       Tidak terjadi kehilangan cuplikan selama pemisahan

4.      KEKURANGAN

a.       Kapasitas puncak terbatas

b.      Tidak digunakan untuk cuplikan dengan ukuran yang hampir sama

c.       Prinsip pemisahan tidak seperti metoda lain

5.      FASE YANG DIGUNAKAN

a.       Fase diam

Terbagi atas 3 golongan:

-          Kaku : dari kaca atau silika (Ph <7,5 dan > 2)

-          Setengah kaku : mengandung basa, dari resin polisitren dan penyambung silang divinilbenzen. Guna untuk pemisahan senyawa dengan bobot molekul rendah

-          Lunak : tidak digunakan karena mudah dirusak tekanan tinggi

b.      Fase gerak : senyawa organik

6.      PEMBAGIAN BERDASARKAN GEL YANG DIGUNAKAN

Jika digunakan gel hidrofilik sebagai penyaring (misal spadhex) maka dinamakan kromatografi filtrasi gel

Jika digunakan gel hidrofobik (misal polisitren dan divinilbenzen) sebagai penyaring maka dinamakan kromatografi permeasi gel

Sumber:

“Analisis Fisikokimia : Kromatografi Volume 2”

Oleh : Prof. Dr. Harmita, Apt.

Penerbit: buku kedokteran EGC

KROMATOGRAFI ABSORBSI

KROMATOGRAFI ABSORBSI

1.      PRINSIP

Terjadi kompetesi pada permungkaan aktif fase diam ( antar molekul pelarut dan molekul sampel pada kondisi tertentu).

Permungkaan aktif bisa berupa gugus sianol (bersifat agak asam ).

Permungkaan aktif berada dalam partikel dan kanal pori-pori.

Gugus hidrogen akan berinteraksi dengan molekul zat menghasilkan ikatan hidrogen / interaksi dipol.

2.      KEGUNAAN

a.       Pemisahan senyawa berdasarkan gugus fungsional yang dimiliki senyawa tersebut

b.      Pemisahan senyawa dengan polaritas rendah sampai sedang

Misal : benzil alkohol dan urasil

3.      FASE YANG DIGUNAKAN

a.       Fase diam :  silika gel, alumina, karbon

b.      Fase gerak : heksana, heptena, metilen, butilen klorida, kloform, tetrahidrofuran, dietil eter, asetonitril, isopropanol, metanol

4.      YANG HARUS DIPERHATIKAN PADA KROMATOGRAFI ABSORBSI

a.       Ph harus <8 à tujuannya mencegah larutnya silika.

Tidak boleh <2  à tujuannya untuk mencegah rusaknya ikatan Si-C

b.      Kadar air harus sangat diperhitungkan

c.       Pemakaian per kolom sangat dianjurkan àuntuk mencegah penyumbatan kolom

Sumber:

“Analisis Fisikokimia : Kromatografi Volume 2”

Oleh : Prof. Dr. Harmita, Apt.

Penerbit: buku kedokteran EGC